产品FAQ
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q 【Trans 实验常见问题和解答】蛋白质电泳 -- “皱眉”(两边向下中间鼓起)形带原因?

a 主要出现在蛋白质垂直电泳槽中,一般是两板之间的底部间隙气泡未排除干净。
处理办法:可在两板间加入适量缓冲液,以排除气泡。

q 【Trans 实验常见问题和解答】蛋白质电泳 -- “微笑”(两边翘起中间凹下)形带原因?

a 主要是由于凝胶的中间部分凝固不均匀所致,多出现于较厚的凝胶中。
处理办法:待其充分凝固再作后续实验。

q 【Trans 实验常见问题和解答】蛋白质电泳 -- 提高SDS-PAGE电泳分辨率的途径?

a 1)聚丙烯酰胺的充分聚合,可提高凝胶的分辨率。建议做法:待凝胶在室温凝固后,可在室温下放置一段时间使用。忌即配即用或4度冰箱放置,前者易导致凝固不充分,后者可导致SDS结晶。一般凝胶可在室温下保存4天,SDS可水解聚丙烯酰胺。
2)一般常用的有氨基黑、考马斯亮蓝、银染色三种染料,不同染料又各自不同的染色方法。

q 【Trans 实验常见问题和解答】蛋白质电泳 -- 样品如何处理?

a 根据样品分离目的不同,主要有三种处理方法:还原SDS处理、非还原SDS处理、带有烷基化作用的还原SDS处理。
1)还原SDS处理:在上样buffer中加入SDS和DTT(或Beta巯基乙醇)后,蛋白质构象被解离,电荷被中和,形成SDS与蛋白相结合的分子, 在电泳中,只根据分子量来分离。一般电泳均按这种方式处理,样品稀释适当浓度,加入上样Buffer,离心,沸水煮5min,再离心加样。
2)带有烷基化作用的还原SDS处理:碘乙酸胺的烷基化作用可以很好的并经久牢固的保护SH基团,得到较窄的谱带;另碘乙酸胺可捕集过量的DTT,而防止银染时的纹理现象。100ul样品缓冲液中10ul 20%的碘乙酸胺,并在室温保温30min。
3)非还原SDS处理:生理体液、血清、尿素等样品,一般只用1%SDS沸水中煮3min,未加还原剂,因而蛋白折叠未被破坏,不可作为测定分子量来使用。

q 【Trans 实验常见问题和解答】蛋白质电泳 -- 配胶缓冲液系统对电泳的影响?

a 在SDS-page不连续电泳中,制胶缓冲液使用的是Tris-HCL缓冲系统,浓缩 胶是pH6.8,分离胶pH8.8;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中,其pH环境呈弱酸性,因此甘氨酸解离很少,其在电场的作用下,泳动效率低;而CL离子却很高,两者之间形成导电性较低的区带,蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比,这一区带便形成了较高的电压剃度,压着蛋白质分子聚集到一起,浓缩为一狭窄的区带。当样品进入分离胶后,由于胶中 pH的增加,呈碱性,甘氨酸大量解离,泳动速率增加,直接紧随氯离子之后,同时由于分离胶孔径的缩小,在电场的作用下,蛋白分子根据其固有的带电性和分子 大小进行分离。
所以,pH对整个反应体系的影响是至关重要的,实验中在排除其他因素 之后仍不能很好解决问题的情况,应首要考虑该因素。