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q 【Trans 实验常见问题和解答】Western Blot -- 封闭液的选择

a WB用的最适封闭液往往具有系统依赖性。决定合适的封闭液可能增加系 统的信号信噪比。有时,从一个底物转换到另一个底物时,所用的封闭液会使信号减 少或增加背景。对系统进行不同封闭液的尝试可能达到最好的结果。避免使用牛奶做封闭试剂,依赖其抗生素蛋白,因为牛奶含有很多生物素。尽管超级封闭液会有 很好的效果,但我们还是建议在一个特定系统中尝试用几种封闭试剂,因为没有一种最优封闭试剂适合所有系统。

q 【Trans 实验常见问题和解答】蛋白质电泳 -- 蛋白质Marker迁移率不准

a 和其他公司校正过,相对来说很准确,如老师需要给老师提供和其他公司比较图;
不同来源的蛋白自身结构会影响迁移率,marker提供一个相对标准,不像DNA marker那样绝对准确

q 【Trans 实验常见问题和解答】蛋白质电泳 -- 蛋白质Marker缺带

a 上面缺带为marker降解,寄回质检;
下面缺带为小带压缩到一块,凝胶制备或者缓冲液不新鲜;
胶浓度太低小条带易被压到一起,建议提高胶浓度 .

q 【Trans 实验常见问题和解答】蛋白质电泳 -- 浓缩胶与分离胶断裂、板间有气泡对电泳有影响吗?

a 这主要出现在初学者中,一般对电泳不会有太大的影响。前者主要原因是拔梳子用力不均匀或过猛所致;后者是由于在解除制胶的夹子后,板未压紧而致空气进入引起的。

q 【Trans 实验常见问题和解答】蛋白质电泳 -- 为什么电泳电压很高而电流却很低呢?

a 这种现象一般初学者易出现。比如电压50V以上,可电流却在5mA以下。主要是由于电泳槽没有正确装配,电流未形成通路。包括:a.内外槽装反;b.外槽液过少;c.电泳槽底部的绝缘体未去掉(比如倒胶用的橡胶皮)。
处理办法:电泳槽正确装配即可。