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q 【RT-PCR常见问题解答】反转录反应温度在42°C和50°C-55°C反应有何差别?

a 一般的反转录酶的适宜反应温度是42°C,但是对于某些GC含量高的基因或二级结构复杂的基因,在42°C不足以打开二级结构,使cDNA合成无法顺利进行,此时需要耐高温的反转录酶,如TransScript® Ⅱ  RT,在高温(50°C-55°C)条件下进行反转录以获得较好的结果。

q 【RT-PCR常见问题解答】RNase H活性对反转录反应的影响?

a RNase H高活性能够催化降解RNA/DNA杂交体中的RNA。RNase H低活性减少了第一链cDNA合成反应中RNA/DNA杂交体中模板RNA被降解,从而保证第一链cDNA的合成量和长度。