产品FAQ
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q 【qPCR常见问题解答】CT值出现过晚?

a 可能是扩增效率低,反应条件不够优化。此外PCR各种反应成分的降解或者PCR产物太长(一般采用80-250 bp的产物长度)也会造成CT值出现过晚。

q 【qPCR常见问题解答】Passive Reference Dye的作用是什么,如何使用?

a 它们是针对不同机器型号校正加样管间误差的参比荧光染料。它们的浓度为50x,使用时在20μl体系中加入0.4μl即可。

q 【RT-PCR常见问题解答】RT-PCR时模板一般使用多少?

a 反转录反应体系为20 μl时,用50 ng-5 μg /5-500 ng Total RNA/mRNA进行反转录,RT-PCR用1/20-1/10 PCR体积(2.5-5 μl)的反转录产物作为PCR模板(50 μl反应体系)。

q 【RT-PCR常见问题解答】基因克隆测序后经常发生突变的原因?

a 从cDNA进行基因克隆时,突变有可能发生在反转录过程,也可能发生在PCR过程中。一般用保真性高的Taq酶或者Pfu酶进行扩增,循环数不要太高;可通过减少模板量、减少循环数降低突变几率。为保证反转录时的保真性请选择保真性高的反转录酶。

q 【RT-PCR常见问题解答】RT-PCR后,无PCR产物的原因?

a 在反转录反应前一定要电泳验证RNA的完整性,确认RNA没有降解。RNA模板不要保存时间太长,尽快进行反转录及PCR操作。