产品FAQ
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q 【克隆常见问题解答】PCR鉴定重组子失败?

a 当用通用引物鉴定重组子,没有得到目的扩增产物,又没有载体自连带,说明PCR失败。重新优化PCR条件或提取质粒,以质粒作模板扩增或酶切鉴定包含重组子的克隆。

q 【克隆常见问题解答】用多克隆位点上的酶切位点切不开?

a 筛选到的克隆来源于模板质粒而不是连接产物。推荐使用双抗载体,筛选时使用模板质粒不具有的抗性。

q 【克隆常见问题解答】连接产物可以保存多久?

a 连接产物可以置于-20°C或4°C冰箱,一周内使用。

q 【克隆常见问题解答】反应时间多长合适?

a ●大多数1 kb以内的PCR产物室温反应5分钟即可完成反应。以下几种情况可以延长反应时间以获得更理想的效果。
●具有特殊结构(高AT/高GC/反向重复序列)的片段:10-20分钟。
●胶回收片段或加“A”片段:10-15分钟(该条件适用于3kb以内的片段)。
●大于3kb的PCR产物需延长至15-20分钟。

q 【克隆常见问题解答】插入片段的量多少合适?

a ●片段加入量可根据片段大小不同进行调整。
最佳插入片段DNA量:载体与片段摩尔比=1:7
●可以粗略的按照“1 kb 20 ng”的比例计算。(如1 kb加20 ng,1.5 kb加30 ng等)
(在胶上通过TransGen的DNA分子量标准粗定量即可)
●片段加入量最大为4 μl,即使片段浓度很低也不要超过此限。片段加入量最小为0.5 μl,可以补充无菌水以方便操作。
●反应温度范围:20-37°C,最适反应温度为25°C。