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q 【PCR常见问题解答】扩增效率低:条带较弱或无扩展(1)

a 酶的原因:实验表明,PCR酶对DNA具有一定的偏好性。如使用一种酶经过优化也难以获得理想扩增时,可以尝试别的PCR酶。

q 【RNA纯化常见问题解答】提取后的RNA样品降解

a 可能原因:
1、RNA样品反复冻融
2、RNA样品保存条件不合适
解决方案:
1、反复冻融会使RNA片段断裂,影响RNA的完整性。
2、根据保存时间和材料的不同,RNA应保存在不同的溶液中。如从胰脏、肝脏等RNase含量较高的材料中提取的样品需要储存在甲醛或甲酰胺中以保存高质量的RNA,而在脾脏中提取的RNA可在水中长期稳定保存。

q 【RNA纯化常见问题解答】RNA中有基因组DNA污染

a 可能原因:
1、材料中核酸含量高
2、样品过量
3、RNA沉淀条件不合适
解决方案:
1、脾脏、胸腺等组织中的核酸含量较高,可进行多次酚/氯仿抽提以去除多余的DNA。也可以在提取后加入DNase Ⅰ处理,降解DNA。
2、增加TransZolTM用量。
3、使用异丙醇沉淀RNA时,加入的异丙醇与提取液的比例偏高,溶液的pH值偏小,都容易使DNA形成沉淀。

q 【RNA纯化常见问题解答】RNA提取量低(2)

a 可能原因:
RNA沉淀条件不合适
解决方案:
使用异丙醇沉淀RNA时,加入的异丙醇与提取液的比例为严格的1:1,否则会明显影响RNA沉淀的效率和RNA的纯度。特殊材料(如含有多糖多酚等)可通过添加适量的柠檬酸钠来改善沉淀效果。

q 【RNA纯化常见问题解答】RNA提取量低(1)

a 可能原因:
1、材料RNA含量较低
2、材料中蛋白和脂肪含量较高
解决方案:
1、对于RNA含量较低的纤维组织(肌肉组织或纤维素较高的植物组织)可适当提高起始材料的用量。
2、蛋白和脂肪含量较高的材料可用氯仿对上清再次抽提。