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q 【原核蛋白表达常见问题解答】蛋白不表达或表达量很低?(4)

a ArtMediaTMProtein Expression培养基。

q 【原核蛋白表达常见问题解答】蛋白不表达或表达量很低?(3)

a 表达条件的优化
●选择不同的培养基。对于某些蛋白,在培养基中加入适量的葡萄糖(0.1%-0.5%),可以明显提高表达量。
●较高的温度、较高的诱导物浓度、较长的表达时间,一般可以加快表达的速度,促进目的蛋白的积累,从而提高表达量。但可能会降低可溶蛋白的表达量,形成包涵体。
●细胞的生长状态对蛋白表达有很大的影响,可以通过测量菌液的OD600值监测生长状态。对于大部分蛋白,应在菌株的对数生长期(OD600=0.5)进行诱导

q 【原核蛋白表达常见问题解答】蛋白不表达或表达量很低?(2)

a 尝试不同的表达载体与菌株
不同的蛋白,对不同载体与菌株的偏好不同,如果某一表达蛋白无法通过优化诱导表达条件得到明显改善,可以更换其他菌株或表达载体。

q 【原核蛋白表达常见问题解答】蛋白不表达或表达量很低?(1)

a 选择正确的表达载体和表达菌株
●T7启动子的载体(如pET系列载体)应选用BL21(DE3),BL21(DE3) pLysS,Transetta(DE3)等菌株。非T7启动子的表达载体(如Tac启动子的pGEX,pMAL系列表达载体)应选用BL21表达菌株。

q 【PCR常见问题解答】Pfu酶扩增片段如何加“A”?

a 在10 μl体系中,加入纯化后PCR产物,0.2 μl Taq DNA Polymerase,o.5 μl 10 mM dNTP(或0.5 μl 2.5 mM dATP),1 μl 10×Taq Buffer,72℃反应10-15分钟即可。