产品FAQ
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q 【Protein Marker使用常见问题解答】条带模糊的原因?

a ●电压过高或电泳时间过长,产热过多导致电泳缓冲液温度升高。建议参照Trans产品使用说明书。
●电泳缓冲液陈旧,建议使用新鲜的电泳缓冲液,为了获得理想的结果建议在使用前预冷缓冲液。
●分离胶的浓度偏低,建议使用合适的胶浓度。
●凝胶放置时间过长,建议使用新配制的凝胶电泳。

q 【His标签蛋白纯化常见问题解答】目的蛋白没有洗脱?

a ●目的蛋白量太少,无法检出。建议更换灵敏度更高的检测方法,如用银染法或Western Blot替代考马斯亮蓝染色,或优化上游表达条件,获得更多的目的蛋白。
●目的蛋白没有结合介质。建议检测一下全部样品以确认蛋白:上样前、流穿、洗涤、洗脱。
●目的蛋白结合牢固。建议增加洗脱强度,如更高浓度的咪唑或更低的pH值。

q 【His标签蛋白纯化常见问题解答】洗脱液中杂蛋白多?(2)

a ●目的蛋白降解。建议在低温下纯化目的蛋白,并在平衡液与样品缓冲液中加入蛋白酶抑制剂(PMSF)
●存在表达提前终止(N端融合表达His标签)或二级翻译起始(C端融合表达His标签)。建议更换表达载体。

q 【His标签蛋白纯化常见问题解答】洗脱液中杂蛋白多?(1)

a ●洗脱条件不合适。建议使用咪唑浓度梯度或pH值梯度洗脱。不同蛋白质最佳洗脱条件不同,需要摸索优化。
●杂蛋白与介质存在非特异性结合。建议在平衡液与样品缓冲液中加入一定浓度的咪唑(推荐浓度:≤20 mM,因蛋白而异),抑制非特异性结合。
●目的蛋白降解。建议在低温下纯化目的蛋白,并在平衡液与样品缓冲液中加入非离子型去垢剂(Triton X-100:≤1%)、甘油(≤10%)、NaCI(≥300 mM)、还原剂(β-巯基乙醇:≤20 mM)等物质。

q 【His标签蛋白纯化常见问题解答】目的蛋白不与介质结合?(2)

a ●缓冲液存在问题。使用Ni-NTA或Ni-IDA介质纯化His标签蛋白时,平衡液与样品缓冲液中的某些组分可能会干扰目的蛋白的结合。部分组分建议浓度如下:
EDTA:≤0.1 mM(建议不要使用)
DTT:≤1 mM(不推荐使用)
β-巯基乙醇:≤20 mM(慎用)
咪唑:≤20 mM(因蛋白而异)