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q 【Trans 实验常见问题和解答】PCR--假阴性(1)

a 可能原因:
(1)模板:①模板中含有杂蛋白质;②模板中含有Taq酶抑制剂;③模板中蛋白质没有消化除净,特别是染色体中的组蛋白;④在提取制备模板时丢失过多,或吸入酚,模板本身拷贝数低;⑤模板核酸变性不彻底。 对策:纯化模板;配制有效而稳定的消化处理液,其程序亦应固定不宜随意更改;如果怀疑污染了抑制剂,可以使用乙醇沉淀DNA。
(2)酶失活 对策:需更换新酶,或新旧两种酶同时使用,以分析是否因酶的活性丧失或不够而导致假阴性。
(3)靶序列变异:如靶序列发生突变或缺失,影响引物与模板特异性结合,或因靶序列某段缺失使引物与模板失去互补序列,其PCR扩增是不会成功的。
(4)物理原因:变性对PCR扩增来说相当重要,如变性温度低,变性时间短,极有可能出现假阴性;退火温度过低,可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率退火温度过高影响引物与模板的结合而降低PCR扩增效率。
对策:优化PCR温度,有时还有必要用标准的温度计,检测一下扩增仪或水溶锅内的变性、退火和延伸温度。

q 【实验技术服务问题详解】如何将样品寄送给我们?

a 我们会安排专门的物流人员与您联系,保证您的样品在最佳的保存条件下进行运送。

q 【实验技术服务问题详解】如果实验失败,还收取服务费吗?

a 由于我们的原因没能达到客户实验目的,我们只收取完成部分的费用。

q 【实验技术服务问题详解】提交订单后,如何了解实验进程?

a 我们会对每个实验项目指派专人技术支持,在实验过程中的每个阶段与客户及时沟通,告知实验进展。

q 【实验技术服务问题详解】实验技术服务过程中使用的产品是全式金的产品吗?

a 我们会默认选用全式金产品进行实验操作,若客户有特殊要求,需提供相关产品。