产品FAQ
首页 > 服务与支持 > 产品FAQ

q 【Trans 实验常见问题和解答】胶回收--如何提高胶回收的得率?

a Agarose抑制DNA与吸附材料的结合,将不含DNA片段多余的 Agarose切除,能显著提高回首效率。DNA结合到吸附材料,需要一定浓度的结合剂,Agarose多了,结合剂的相对浓度就会下降,得率就受到影响。大多数情况下,是由于电泳时琼脂糖的浓度不同,切下的胶块有大有小,得率自然不同。回收的得率还与回收片段的大小有关。提高结合剂的相对浓度,增加 DNA与吸附材料作用时间(放置时间),控制好离心速度都一定程度上可以提高得率。改善洗脱条件,如提高洗脱溶液的pH值,温度,增加洗脱液的体积等也可以提高得率,但是对于pH过高,可能会影响下游反应,通常情况下采用pH8.8为宜。

q 【Trans 实验常见问题和解答】胶回收--如何计算提取率

a 1) 由于回收前样品中,往往含有非目的 DNA 片段,引物,dNTP等,所以不能用测回收前后吸光度的的方法计算回收率。
2) 可将回收前后 DNA 片段一起电泳,使用凝胶成像系统拍照后,用配套的软件进行电泳条带灰度对比。
3) 注意,电泳条件及拍摄条件将对灰度对比结果造成很大影响,请仔细操作,以减小误差。

q 【Trans 实验常见问题和解答】胶回收--提取率低

a 1) 融胶液为酸性缓冲液,如融胶后,其pH值升高将影响提取得率。请加入0.1倍体积的3M乙酸钾(pH5.0)。
2) 长时间使用后没有更换的电泳缓冲液,其pH值较高,将影响 DNA 的吸附。请更换新的电泳缓冲液后,再进行电泳,然后切胶。
3) 在洗脱前,将洗脱液于30~60℃温浴,可提高提取效率。

q 【Trans 实验常见问题和解答】胶回收--没有回收到 DNA 片段

a 一点都不能得到产物的回收情况很少见,有些情况是判定回收效率的方式不对。如对,请检查一下洗液中有没有加入酒精;检查加入的DNA结合剂的量对不对;洗脱前有没有将残留得酒精去彻底;洗脱液有没有使吸附材料充分接触(洗脱),接触的时间是否充分。

q 【Trans 实验常见问题和解答】DNA电泳--DNA电泳的Marker出现扭曲

a 1)配制胶时的缓冲液需要和电泳缓冲液不是同时配制的。最好是同时配制.电泳时缓冲液高过液面1-2mm即可。
2) 电泳时电压过高,可以在电泳前15分钟用较低电压(3V/cm),等条带出孔后比较漂亮了.然后再调电压。
3) 上样时尽量慢慢加样,等样品自然沉降后再加电压。